Сайт для врачей о
клинической лабораторной диагностике
Подсчет количества ретикулоцитов при помощи люминесцентной микроскопии
см. также основную статью Ретикулоциты
Метод подсчета количества ретикулоцитов при помощи люминесцентной микроскопии отличается простотой и требует немного времени, более точен по сравнению с обычным методом, так как при люминесцентной микроскопии обнаруживаются мельчайшие зерна сетчато-нитчатого вещества, однако он возможен только при наличии люминесцентного микроскопа и специальных красителей, в связи с чем доступен лишь немногим лабораториям.
Принцип подсчета количества ретикулоцитов при помощи люминесцентной микроскопии
Использование способности субстанции ретикулоцитов флюоресцировать после обработки крови акридиновым оранжевым.
Реактивы
- Раствор акридинового оранжевого на изотоническом растворе хлорида натрия в концентрации 1:5000. Для приготовления изотонического раствора рекомендуют использовать дистиллированную воду pH 5,8 – 6,8. Раствор акридинового оранжевого должен быть свежим; хранят его не более 3 – 5 дней в темном флаконе с притертой пробкой.
- Нефлюоресцирующее иммерсионное масло. Можно использовать афлуоль или обычное иммерсионное масло с флюоресценцией, погашенной нитробензолом (0,3 мл нитробензола на 1 мл масла). Ю.Н. Зубжицкий в качестве нефлюоресцирующего масла предлагает использовать перегнанный анизол.
Специальное оборудование
Микроскоп ультрафиолетовый МУФ-3М или люминесцентный.
Ход определения
Кровь смешивают с акридиновым оранжевым в пробирке или смесителе в соотношении 1 часть крови и 10 частей краски (смесь можно хранить не более 5 часов). Смесь перемешивают в течение 2 минут, каплю смеси наносят на предметное стекло и накрывают покровным стеклом. При этом жидкость не должна выходить за пределы покровного стекла. Микроскопируют с помощью светофильтра ЖС-17. В препарате эритроциты имеют темно-зеленые очертания и не флюоресцируют, а в ретикулоцитах зернисто-сетчатая субстанция светится ярко-красным цветом, благодаря чему ретикулоциты легко подсчитать. Замечено, что в крови, стабилизированной гепарином или цитратом натрия, флюоресценции ретикулоцитов не наблюдается.
Подсчитывают 1000 клеток (эритроцитов и ретикулоцитов), подобно подсчету ретикулоцитов в мазках, после окраски специальными красителями. Результат выражают в процентах или промилле.
Клиническое значение определения количества ретикулоцитов.
Литература:
- Справочник "Лабораторные методы исследования в клинике" под редакцией Меньшикова В. В. - Москва, "Медицина", 1987 г
- Справочник по клиническим лабораторным методам исследования под редакцией Кост Е. А. - Москва, "Медицина", 1975 г.
Новые статьи
2 января, 2013
Мочевая кислота. Неорганизованные осадки мочи.
Обычно мочевая кислота в моче микроскопически определяется в виде желтых, желто-зеленых и бурых или буро-фиолетовых кристаллов. Макроскопически же наличие большого количества мочевой кислоты определяется в виде буро-желтого или золотисто-желтого песка...
Раздел: Анализ мочи
15 мая, 2012
Неорганизованные осадки мочи
Неорганизованные осадки мочи состоят из различных солей, органических соединений и лекарственных веществ, осевших в моче в виде кристаллов или аморфных тел. Однако чаще неорганизованный осадок состоит преимущественно из солей...
Раздел: Анализ мочи
22 марта, 2012
Микроскопическое исследование осадка мочи
Микроскопическое исследование осадка мочи является неотъемлемой частью общеклинического исследования и часто служит основным методом диагностики заболеваний почек и мочевыводящих путей...
Раздел: Анализ мочи
5 июня, 2011
Глюкоза в моче. Клинико-диагностическое значение глюкозурии.
Появление глюкозы в моче называется глюкозурией. Глюкозурия обычно сопровождается полиурией при повышении осмолярности мочи, поскольку глюкоза - осмотически активное вещество. Между степенью глюкозурии и полиурии обычно наблюдается параллелизм...
Раздел: Анализ мочи
21 июля, 2010
Кетоновые тела в моче. Методы определения.
Принцип обнаружения кетоновых тел в моче. Нитропруссид натрия в щелочной среде реагирует с кетоновыми телами, образуя комплекс, окрашенный в розовато-сиреневый, сиреневый или фиолетовый цвет. Чувствительность проб около 50 мг/л кетоновых тел. Полуколичественную оценку результатов можно дать в интервале от 150 до 1500 мг/л...
Раздел: Анализ мочи